Gastrin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403220-ACT

O GAST humano codifica a gastrina, um hormônio peptídico produzido principalmente pelas células G gástricas, que regula a secreção de ácido gástrico, o crescimento da mucosa e a motilidade gastrointestinal. A gastrina sinaliza principalmente por meio do receptor de colecistocinina B (CCKBR), ativando vias intracelulares como PLC/PKC, MAPK/ERK e sinalização dependente de cálcio para modular a proliferação epitelial e programas secretores. A expressão desregulada de gastrina e alterações na sinalização gastrina–CCKBR têm sido associadas a remodelamento da mucosa gástrica relacionado à hipergastrinemia e a perturbações mais amplas da homeostase endócrina digestiva. Como marcador e regulador da função endócrina gástrica, o GAST é frequentemente estudado em modelos de fisiologia gástrica, sinalização associada à inflamação e diferenciação epitelial.

Gastrin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GAST sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Gastrin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GAST em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GAST, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Gastrin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GAST nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Gastrin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Gastrin em células tumorais com expressão de GAST silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.