The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
GARNL4双切口酶质粒(h): sc-411668-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- GARNL4 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- GARNL4双切酶质粒（h）和GARNL4双切酶质粒（h2）编码针对RAP1GAP2的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
GARNL4双切口酶质粒(h) | sc-411668-NIC | 20 µg | $410.00 |
RAP1GAP2 编码 GARNL4，这是一种 Rap GTP 酶激活蛋白（GAP），可加速 Rap1/Rap2 上的 GTP 水解，从而在质膜与细胞骨架层面限制小 GTP 酶信号传导。通过调控 Rap 依赖的整合素激活、细胞黏附与肌动蛋白重塑，GARNL4 参与调节血小板和白细胞的信号传递、运输/迁移以及刺激耦联的应答过程。该 RAP1 通路通过上游受体与适配蛋白复合体与 MAPK/ERK 及 PI3K 相关网络发生交叉，进而影响细胞激活阈值与分泌动力学。Rap 信号失调以及 GAP 活性改变常见于异常止血、炎症信号以及与癌症相关的黏附与迁移变化等研究情境中。
GARNL4 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 RAP1GAP2 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对RAP1GAP2内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏RAP1GAP2的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了RAP1GAP2基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。