GALR2CRISPR激活质粒(h): sc-403779-ACT

人类 **GALR2** 基因编码加兰素受体 2（GALR2），这是一种 A 类 GPCR，可结合神经肽加兰素（galanin），从而调节神经元兴奋性、神经递质释放以及神经内分泌分泌。配体结合后，GALR2 主要与 Gq/11 偶联，激活 PLCβ 以及 IP3/DAG 信号通路，引发细胞内 Ca2+ 动员并启动 PKC 依赖性通路；此外，在不同细胞与环境背景下，它也可与其他 G 蛋白发生偶联，从而影响 MAPK/ERK 信号及相关基因表达程序。上述信号输出使 GALR2 与疼痛加工、情绪相关行为、进食与能量平衡调控，以及外周组织中的平滑肌收缩等过程相关。GALR2 表达或信号传导失调已在神经精神与代谢相关表型，以及肿瘤生物学中受到研究；在肿瘤中，GPCR 驱动的通路可影响细胞增殖、生存与迁移，因此 GALR2 也具有作为机制研究中通路探针的价值。

GALR2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GALR2的表达。

GALR2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的GALR2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于GALR2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性GALR2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的GALR2位点，并能够研究内源性位点上依赖于GALR2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GALR2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟GALR2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。