GalNAc-T6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431525-ACT

Galnt6 codifica a polipeptídeo N-acetilgalactosaminiltransferase 6 (GalNAc-T6), uma enzima iniciadora, residente no complexo de Golgi, da O-glicosilação do tipo mucina, que transfere GalNAc para resíduos de Ser/Thr em proteínas secretadas e de membrana. Ao estabelecer sítios de O-glicanos em mucinas e em outras glicoproteínas, a GalNAc-T6 influencia o dobramento proteico, a suscetibilidade a proteases, a organização de receptores e as interações com a matriz extracelular, moldando a adesão celular, a motilidade e a transdução de sinais. Padrões alterados de O-glicosilação são frequentemente associados ao remodelamento epitelial e a microambientes inflamatórios, tornando o Galnt6 um nó relevante para estudar a regulação do glicoproteoma em contextos associados a doenças. Em modelos murinos, a modulação da atividade de Galnt6 pode ser usada para investigar como o início da O-glicosilação impacta a homeostase tecidual e a responsividade de vias de sinalização.

GalNAc-T6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Galnt6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GalNAc-T6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Galnt6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Galnt6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GalNAc-T6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Galnt6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GalNAc-T6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GalNAc-T6 em células tumorais com expressão de Galnt6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.