galectin-4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404255-ACT

ヒトのLGALS4は、β-ガラクトシド結合性レクチンであるガレクチン-4をコードしており、消化管上皮に豊富に発現します。ガレクチン-4は、上皮の極性、細胞—細胞および細胞—細胞外マトリックスの接着、ならびに粘膜バリアの構築に寄与します。ガレクチン-4は糖鎖修飾された受容体や膜マイクロドメインと相互作用して、トラフィッキング、シグナル伝達、細胞分化プログラムを調節し、炎症、免疫—上皮間コミュニケーション、上皮恒常性を制御する経路との関連も示されています。LGALS4の発現異常は消化管疾患や腫瘍生物学で報告されており、レクチン—糖鎖相互作用の変化が浸潤、遊走、免疫環境（免疫コンテクスト）に影響し得ます。分泌型かつ膜結合性のレクチンであるガレクチン-4は、上皮状態の遷移や糖鎖依存的シグナル伝達を研究するためのマーカーとしても用いられます。

galectin-4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LGALS4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

galectin-4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LGALS4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLGALS4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性galectin-4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLGALS4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるgalectin-4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLGALS4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるgalectin-4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。