galectin-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417680-ACT

O LGALS3 humano codifica a galectina-3, uma lectina ligante de β-galactosídeos que regula interações célula–célula e célula–matriz, endocitose e sinalização intracelular em compartimentos epiteliais e imunes. A galectina-3 modula vias associadas à inflamação e à imunidade inata, incluindo a ativação de macrófagos, programas transcricionais ligados ao NF-κB e o remodelamento induzido por citocinas, e pode influenciar, de modo dependente do contexto, a resistência à apoptose, a autofagia e respostas ao estresse oxidativo. Por seus papéis em adesão, migração e renovação da matriz extracelular, o LGALS3 é frequentemente estudado na biologia da fibrose e na comunicação cruzada no microambiente tumoral, bem como em processos cardiometabólicos e neuroinflamatórios. A expressão desregulada de galectina-3 tem sido associada a estados inflamatórios crônicos e a fenótipos de progressão em diversos cânceres, o que a torna um alvo molecular amplamente utilizado para investigar mecanismos e vias.

galectin-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LGALS3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

galectin-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LGALS3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LGALS3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de galectin-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LGALS3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de galectin-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via galectin-3 em células tumorais com expressão de LGALS3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.