GALE CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408127-ACT

ヒトのGALE（UDP-ガラクトース4-エピメラーゼ）は、UDP-ガラクトースとUDP-グルコース、ならびにUDP-N-アセチルガラクトサミンとUDP-N-アセチルグルコサミンの可逆的相互変換を触媒し、ルロワール経路をより広範なヌクレオチド糖代謝へと結び付けています。これらの作用を通じてGALEは糖質恒常性の維持に寄与するとともに、タンパク質のフォールディング、細胞内輸送、細胞間シグナル伝達を形作る糖鎖付加（グリコシル化）過程に必要な活性化糖を供給します。GALE依存的なフラックスが乱れると糖鎖組成が変化し、ERおよびゴルジ体に関連する生合成プログラムに影響を及ぼし得ます。GALEの機能障害はエピメラーゼ欠損型ガラクトース血症と関連しており、代謝ストレス応答やグリコシル化に関連する表現型の研究において重要です。

GALE CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GALEの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GALE CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GALE 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGALE転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GALEの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGALE遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGALE依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGALE発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGALE経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。