GALC Plasmide Double Nickase (h): sc-401025-NIC

Il GALC umano codifica la galattocerebrosidasi, un’idrolasi lisosomiale che scinde il galattosilceramide e sfingolipidi correlati, sostenendo il turnover dei lipidi della mielina e, più in generale, il catabolismo degli sfingolipidi. L’attività di GALC contribuisce a vie di riciclo dipendenti dal lisosoma e aiuta a mantenere l’omeostasi dei lipidi di membrana negli oligodendrociti, nelle cellule di Schwann e in altri tipi cellulari neurali. Un’alterazione della funzione di GALC modifica la processazione lisosomiale degli sfingolipidi ed è associata a patologie neurodegenerative da accumulo lisosomiale, offrendo un punto di accesso meccanicistico per lo studio della mielinizzazione, della neuroinfiammazione e delle risposte cellulari allo stress. Modelli in vitro in cui GALC viene perturbato sono comunemente utilizzati per indagare la biologia dei lisosomi, il rimodellamento del metabolismo lipidico e le conseguenze trascrizionali e proteostatiche a valle.

GALC Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GALC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GALC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GALC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GALC interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.