Gads CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421689

概要

Grap2は、造血系のシグナル伝達因子であるアダプタータンパク質Gadsをコードしており、活性化された免疫受容体を下流のエフェクター経路へとつなぐ役割を担います。T細胞では、Gadsがリン酸化LATとSLP-76を結び付けてシグナル伝達マイクロクラスターの形成を促し、T細胞受容体（TCR）近位のシグナルを増幅します。これにより、PLCγ1の活性化、カルシウム流入、MAPKシグナル、ならびにサイトカイン産生や増殖を制御する転写プログラムが促進されます。このアダプターはリンパ系細胞における他の免疫受容体のシグナル伝達にも関与し、細胞活性化の閾値や免疫シナプスの形成・構造に影響を与えます。Gads依存的なシグナル伝達ネットワークの破綻は、免疫機能異常、炎症性表現型、造血系シグナル伝達異常のモデルでしばしば検討対象となります。

Gads CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGrap2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Grap2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Grap2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Gadsタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Gadsシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Grap2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Gadsの機能に不可欠なGrap2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Grap2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Gads CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGads CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Grap2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Gads HDRプラスミド（m）および Gads HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGrap2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGrap2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。