GADD 34 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400595-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GADD 34O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase GADD 34 (h) e o Plasmídeo Double Nickase GADD 34 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para PPP1R15A. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GADD 34 Anticorpo (B-10): sc-373815
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GADD 34 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400595-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GADD 34 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400595-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPP1R15A codifica a GADD34, uma subunidade reguladora induzível da proteína fosfatase 1 que promove a desfosforilação de eIF2α para encerrar a resposta integrada ao estresse e restaurar a tradução após estresse celular. A GADD34 é regulada positivamente a jusante do estresse do retículo endoplasmático (RE) e de vias de sinalização de dano ao DNA, e modula a proteostase, a suscetibilidade à apoptose e o controle por retroalimentação da resposta a proteínas mal dobradas (unfolded protein response, UPR). Ao controlar a dinâmica de fosforilação de eIF2α, PPP1R15A influencia programas transcricionais associados a ATF4/CHOP e a remodelação adaptativa da expressão gênica induzida por estresse. A desregulação desse eixo tem sido associada a estados patológicos caracterizados por estresse crônico do RE e tolerância ao estresse alterada, o que sustenta seu estudo em neurodegeneração, estresse metabólico e biologia de células cancerosas.
GADD 34 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PPP1R15A em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PPP1R15A. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PPP1R15A. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PPP1R15A interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.