Plásmido CRISPR de Activación (h) GABP-β1/2: sc-404040-ACT

GABPB1 codifica la subunidad beta-1/2 de la proteína de unión a GA (GABP-β1/2), el socio obligatorio de la subunidad de unión al ADN de la familia ETS, que en conjunto forman el complejo del factor de transcripción GABP. Este complejo regula programas de promotores y potenciadores que controlan la biogénesis y la respiración mitocondriales, la progresión del ciclo celular y la diferenciación, coordinando la expresión de genes mitocondriales codificados en el núcleo y otras dianas asociadas al crecimiento. La señalización de GABP se entrecruza con vías que sostienen la homeostasis energética celular, la capacidad proliferativa y la especificación de linaje, y la actividad alterada de GABP se ha vinculado con redes transcripcionales desreguladas en cáncer y otros trastornos del metabolismo celular. Dado que GABP integra la transcripción dependiente de ETS con programas mitocondriales y biosintéticos, GABPB1 se estudia con frecuencia en contextos como la fosforilación oxidativa, la adaptación al estrés y la reprogramación transcripcional oncogénica.

GABP-β1/2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GABPB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GABP-β1/2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GABPB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GABPB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GABP-β1/2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GABPB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GABP-β1/2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GABP-β1/2 en células tumorales con expresión de GABPB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.