GABA_A Rθ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406766

概要

GABRQは、ヒト中枢神経系における速い抑制性神経伝達を担う、五量体のリガンド作動性塩化物チャネルであるGABA\(_A\)受容体のθ（シータ）サブユニットをコードしています。GABA\(_A\)受容体は、塩化物イオン流入と膜の過分極を調節することで、ニューロンの興奮性、シナプス統合、ネットワーク振動を形成し、さらにカルシウム動態、神経伝達物質放出、活動依存的遺伝子発現を制御する経路とも機能的に連関します。特定の受容体サブユニットが関与する抑制トーンの変化は、神経発達性および神経精神疾患に関連する表現型と結び付けられており、発作関連やストレス関連の回路機能障害に対する感受性にも影響し得ます。サブユニット組成、トラフィッキング、受容体の薬理学的特性は抑制性シナプス機能を規定する主要因であるため、GABRQはGABA作動性シグナル伝達機構を解析するうえで有用な標的となります。

GABAA Rθ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGABRQ遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GABRQ内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GABRQのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GABAA Rθタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GABAA Rθシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GABRQ欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GABAA Rθの機能に不可欠なGABRQエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GABRQゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GABAA Rθ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGABAA Rθ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GABRQ遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GABAA Rθ HDRプラスミド（h）および GABAA Rθ HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGABRQホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGABRQ標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。