GABA_A Rδ Double Nickaseプラスミド (h): sc-401954-NIC

GABRDは、ヒトGABA_A受容体のδサブユニット（GABA_A Rδ）をコードしている。GABA_A Rδは抑制性のリガンド作動性塩化物チャネルであり、ニューロンにおいてトニック抑制を担うシナプス外受容体の主要な構成要素として重要な役割を果たす。δサブユニット含有GABA_A受容体は、膜の興奮性やシナプス統合を調節することで、GABA作動性シグナル伝達経路におけるネットワーク振動および神経伝達のバランスに影響を与える。GABRDの発現と受容体構成は、発生過程や神経ステロイドへの応答により厳密に制御されており、このサブユニットが活動依存的可塑性と結び付いていることを示している。δサブユニットの機能や発現の変化は、神経学的・神経精神医学的表現型と関連することが報告されており、抑制性シグナル伝達や回路機能不全の機序研究における重要性を裏付けている。

GABAA Rδ ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GABRD 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GABRD内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GABRDの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GABRDが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。