GABA_A Rβ2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405041-NIC

GABRB2 は、ヒトの γ-アミノ酪酸（GABA）A 型受容体 β2 サブユニット（GABAARβ2）をコードしており、中枢神経系における速い抑制性神経伝達を担うリガンド作動性塩化物チャネルの中核構成要素です。GABAA 受容体の他のサブユニットと集合することで、GABAARβ2 は受容体の輸送、シナプスでのクラスター形成、ならびにチャネルのゲーティング特性に影響を与え、神経細胞の興奮性やネットワーク振動の形成に関与します。GABRB2 の機能は、抑制性シナプスの構築、シナプス後シグナル伝達、活動依存的可塑性と統合されており、興奮—抑制バランスを制御する経路と結び付いています。GABRB2 の遺伝的または機能的な攪乱は、発作感受性を含む神経発達・神経精神疾患様の表現型と関連づけられており、抑制性回路の機能不全を機構的に研究する上で重要な標的です。

GABAA Rβ2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GABRB2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GABRB2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GABRB2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GABRB2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。