G9a CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-430994

概要

マウスのEhmt2は、ヒストンリジンメチルトランスフェラーゼであるG9aをコードしており、ユークロマチン全体にわたって抑制的なクロマチン状態の確立に寄与するH3K9のモノメチル化およびジメチル化の主要な「ライター」です。G9aは、GLP（EHMT1）やヘテロクロマチン関連因子などのクロマチン制御因子と協調することで、胚発生、系譜決定、細胞アイデンティティの維持に関与する転写サイレンシング・プログラムを統括します。クロマチンアクセシビリティと遺伝子発現への作用を通じて、EHMT2はDNA損傷応答、複製タイミング、エピジェネティックな安定性にも影響を与えます。G9a活性の異常やH3K9me2パターンの乱れは、腫瘍生物学、神経発達表現型、炎症性遺伝子の制御といった文脈で広く研究されており、Ehmt2はエピジェネティクス研究における重要な結節点となっています。

G9a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEhmt2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ehmt2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ehmt2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、G9aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、G9aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ehmt2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• G9aの機能に不可欠なEhmt2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ehmt2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• G9a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびG9a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ehmt2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  G9a HDRプラスミド（m）および G9a HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEhmt2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEhmt2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。