G2A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401866-ACT

GPR132はG2Aをコードする遺伝子であり、免疫応答やストレス応答を形作る細胞外の脂質メディエーターや微小環境由来のシグナルを感知することに関与するGタンパク質共役受容体（GPCR）として知られています。G2Aシグナル伝達は、GPCR依存的なセカンドメッセンジャー経路を介して白血球の走化性、マクロファージ活性化、炎症の基調（炎症トーン）の調節に関わり、細胞の生存や分化プログラムにも影響を及ぼすことが示されています。ヒト組織では、GPR132活性の変化が、腫瘍と免疫の相互作用や代謝ストレス生物学と交差する炎症調節の破綻および組織リモデリング過程と関連しています。文脈依存的に異なるシグナル出力を示す膜受容体として、G2Aは脂質センシングが免疫細胞のトラフィッキングや組織恒常性にどのように統合されるかという観点から、しばしば研究対象となっています。

G2A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GPR132の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

G2A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GPR132 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGPR132転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性G2Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGPR132遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるG2A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGPR132発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるG2A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。