G0S2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402335-ACT

G0S2 umano (G0/G1 switch 2) codifica una piccola proteina regolatoria coinvolta nel coordinamento del metabolismo lipidico e della quiescenza cellulare. G0S2 interagisce con enzimi metabolici chiave per modulare la lipolisi ed è stata associata alla funzione mitocondriale, alle risposte allo stress ossidativo e a programmi trascrizionali che plasmano l’omeostasi energetica. La sua espressione è regolata dinamicamente durante la differenziazione e la segnalazione infiammatoria, collegando G0S2 alla biologia degli adipociti, alle transizioni di stato delle cellule immunitarie e a un più ampio adattamento metabolico. Un’espressione deregolata di G0S2 è stata riportata in molteplici contesti patologici, a supporto del suo impiego come strumento molecolare per studiare perturbazioni a livello di via piuttosto che esiti clinici diretti.

G0S2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di G0S2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

G0S2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus G0S2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione G0S2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di G0S2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus G0S2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da G0S2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via G0S2 nelle cellule tumorali con espressione di G0S2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.