G0S2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402335-ACT

O G0S2 humano (G0/G1 switch 2) codifica uma pequena proteína reguladora implicada na coordenação do metabolismo lipídico e da quiescência celular. O G0S2 interage com enzimas metabólicas-chave para modular a lipólise e tem sido associado à função mitocondrial, às respostas ao estresse oxidativo e a programas transcricionais que moldam a homeostase energética. Sua expressão é regulada dinamicamente durante a diferenciação e a sinalização inflamatória, conectando o G0S2 à biologia dos adipócitos, às transições de estado de células imunes e a uma adaptação metabólica mais ampla. A expressão desregulada de G0S2 foi relatada em múltiplos contextos de doença, sustentando seu uso como uma ferramenta molecular para estudar perturbações em nível de vias, em vez de desfechos clínicos diretos.

G0S2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de G0S2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

G0S2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus G0S2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição G0S2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de G0S2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus G0S2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de G0S2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via G0S2 em células tumorais com expressão de G0S2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.