G-CSF Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419844-ACT

O Csf3 de camundongo codifica o fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSF), uma citocina secretada que controla a granulopoiese ao promover a proliferação, a diferenciação e a sobrevivência de progenitores de neutrófilos e ao mobilizar granulócitos maduros da medula óssea. O G-CSF sinaliza principalmente por meio do CSF3R para ativar as vias JAK/STAT, MAPK/ERK e PI3K/AKT, coordenando a homeostase imune inata e as respostas inflamatórias. Alterações na atividade do eixo Csf3/G-CSF são comumente estudadas em modelos de infecção e inflamação estéril, bem como em contextos de expansão mieloide e lesão tecidual mediada por neutrófilos. Em biologia tumoral e imunologia, o G-CSF também é usado para investigar como a mielopoiese induzida por citocinas molda o compartimento mieloide em microambientes inflamatórios.

G-CSF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Csf3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

G-CSF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Csf3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Csf3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de G-CSF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Csf3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de G-CSF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via G-CSF em células tumorais com expressão de Csf3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.