FucT-l Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420423

Visão geral

Fut1 codifica a α(1,2)fucosiltransferase 1 (FucT-1), uma glicosiltransferase residente no Golgi que transfere fucose de GDP-fucose para resíduos terminais de galactose, gerando glicanos α1,2-fucosilados, como os antígenos do tipo H, em glicoproteínas e glicolipídios. Essa etapa enzimática é um componente central da maturação de glicoesfingolipídios e glicoproteínas e molda os padrões de carboidratos na superfície celular que influenciam a ligação a lectinas, a organização de membrana e o reconhecimento intercelular. A fucosilação dependente de Fut1 se cruza com vias que controlam a diferenciação epitelial, a função de barreira mucosa e as interações hospedeiro–microrganismo por meio da modulação da adesão e da sinalização mediadas por glicanos. Alterações na α1,2-fucosilação têm sido associadas à inflamação e à desregulação imune em múltiplos contextos, tornando Fut1 um alvo útil para estudos mecanísticos de fenótipos dependentes de glicanos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO FucT-l (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Fut1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Fut1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Fut1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína FucT-l.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Fut1 para a investigação da sinalização de FucT-l, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Fut1 críticos para a função FucT-l
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Fut1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo FucT-l Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo FucT-l Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Fut1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo FucT-l Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR FucT-l (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Fut1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Fut1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.