Fucokinase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409449

Visão geral

O FUK humano codifica a fucocinase, uma quinase citosólica que fosforila a L-fucose em fucose-1-fosfato na via de reaproveitamento (salvamento) da fucose, fornecendo substrato para a biossíntese de GDP-fucose. Ao contribuir para os reservatórios celulares de fucose ativada, o FUK sustenta a fucosilação de glicoproteínas e glicolipídios, uma modificação que modula a sinalização de receptores, a adesão célula–célula e o reconhecimento imune. Alterações no metabolismo da fucose e nos padrões de fucosilação têm sido associadas a inflamação desregulada, sinalização oncogênica e mudanças na invasividade de células tumorais, tornando o FUK um ponto relevante para o estudo de fenótipos dependentes de glicanos. A investigação funcional do FUK ajuda a conectar o fluxo metabólico por vias de açúcares nucleotídicos à atividade de glicosiltransferases e às alterações subsequentes nos glicoproteomas de membrana e secretados.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Fucokinase (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene FUK em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do FUK, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do FUK na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Fucokinase.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de FUK para a investigação da sinalização de Fucokinase, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) FUK críticos para a função Fucokinase
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos FUK para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Fucokinase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Fucokinase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus FUK. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Fucokinase Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Fucokinase (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia FUK para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo FUK definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.