FUCA2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405221-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- FUCA2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- FUCA2ダブルニカースプラスミド（h）およびFUCA2ダブルニカースプラスミド（h2）は、FUCA2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: FUCA2 抗体 (B-11): sc-514038
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
FUCA2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-405221-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FUCA2 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-405221-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FUCA2はリソソームα-L-フコシダーゼ2をコードしており、これはN結合型およびO結合型糖鎖複合体から末端フコース残基を除去するエキソグリコシダーゼで、糖鎖の分解（カタボリズム）やリモデリングに寄与します。フコシル化糖タンパク質や糖脂質のターンオーバーを調節することで、FUCA2はリソソーム依存的なクリアランス過程や、細胞表面における糖鎖修飾に関連したより広範なシグナル伝達事象に影響を与えます。フコシダーゼ活性やフコシル化パターンの変化は、炎症、免疫認識、細胞外マトリックスとの相互作用の変化と関連づけられており、FUCA2はグライコーム制御の研究に有用な結節点となります。FUCA2を含むフコシダーゼの発現や活性の破綻は、がん生物学や代謝・免疫関連の表現型などの文脈で報告されており、関連モデル系における機構解析を支持します。
FUCA2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FUCA2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FUCA2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FUCA2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FUCA2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。