FRS2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400656-ACT

FRS2 (substrato 2 do receptor do fator de crescimento de fibroblastos) é uma proteína adaptadora próxima à membrana que acopla FGFRs ativados a cascatas de sinalização a jusante, incluindo as vias RAS–MAPK/ERK e PI3K–AKT. Por meio do seu domínio PTB e de múltiplos sítios de fosforilação em tirosina, a FRS2 coordena o recrutamento de GRB2/SOS e GAB1 para propagar sinais mitogênicos e de sobrevivência que moldam proliferação, diferenciação e migração. A sinalização dependente de FRS2 é central para programas de desenvolvimento e de homeostase tecidual conduzidos por ligantes FGF, e a atividade aberrante do eixo FGFR–FRS2 está implicada na desregulação da sinalização de crescimento na biologia do câncer. Como nó de via, a FRS2 é frequentemente estudada por seu papel na integração de sinais de receptores tirosina-quinase, na regulação por feedback e no crosstalk com outras vias de fatores de crescimento.

FRS2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FRS2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FRS2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FRS2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FRS2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FRS2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FRS2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FRS2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FRS2 em células tumorais com expressão de FRS2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.