FRP-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422898
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- FRP-3 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico FRP-3, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:FRP-3 Anticorpo (B-5): sc-514350
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
FRP-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422898 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Frzb codifica a FRP-3 (também conhecida como proteína 3 relacionada ao frizzled secretada), um modulador extracelular da sinalização Wnt que se liga a ligantes Wnt e pode atenuar a ativação dos receptores Frizzled. Ao moldar a transcrição canônica dependente de β-catenina e as vias Wnt não canônicas, a FRP-3 contribui para a regulação do padrão embrionário, da morfogênese tecidual e da diferenciação de linhagens mesenquimais, incluindo a homeostase do osso e da cartilagem. Em modelos murinos, alterações na atividade da FRP-3 têm sido associadas a mudanças na dinâmica de formação óssea e na remodelação da matriz extracelular, processos frequentemente ligados a anomalias do desenvolvimento e fenótipos degenerativos. Como a sinalização Wnt está intimamente acoplada a decisões de destino celular e ao controle proliferativo, Frzb é amplamente estudado em contextos em que o desequilíbrio da via contribui para remodelação tecidual associada à inflamação e para a biologia tumoral.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO FRP-3 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Frzb em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Frzb, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Frzb na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína FRP-3.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Frzb para a investigação da sinalização de FRP-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Frzb críticos para a função FRP-3
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Frzb para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo FRP-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo FRP-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Frzb. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo FRP-3 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR FRP-3 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Frzb para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Frzb definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.