frizzled-7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420437

概要

マウスのFzd7は、細胞外のWntリガンドを細胞内シグナル出力へと変換する、7回膜貫通型のWnt受容体であるfrizzled-7をコードします。Frizzled-7は、βカテニン依存的な転写プログラムに加えて、非カノニカルな平面細胞極性（PCP）経路およびWnt/Ca²⁺経路も制御し、発生および組織恒常性の過程で、増殖、極性、遊走、運命決定を形作ります。Fzd7シグナルの異常は、複数の実験モデルにおいて幹／前駆細胞の挙動異常や腫瘍性経路の活性化と関連づけられており、Wntネットワーク制御を解析するための有用な入口となります。細胞系では、Fzd7の操作は、受容体レベルでのWntシグナル伝達の特異性や、受容体型チロシンキナーゼおよびHippo/YAP関連プロセスとのクロストークを検証する目的で一般的に用いられます。

frizzled-7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFzd7遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Fzd7内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Fzd7のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、frizzled-7タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、frizzled-7シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Fzd7欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• frizzled-7の機能に不可欠なFzd7エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Fzd7ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• frizzled-7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびfrizzled-7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Fzd7遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  frizzled-7 HDRプラスミド（m）および frizzled-7 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFzd7ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFzd7標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。