FRAS1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407225-ACT

FRAS1 codifica uma proteína associada à matriz extracelular que se localiza na interface epitélio–mesênquima e sustenta a integridade da membrana basal durante o desenvolvimento embrionário. Ela participa de processos de adesão e organização da matriz que coordenam a morfogênese epitelial, incluindo o desenvolvimento da pele e do trato renal, e ajuda a estabilizar a arquitetura dos tecidos sob estresse mecânico. A disfunção de FRAS1 está associada a distúrbios do desenvolvimento caracterizados por anomalias congênitas multissistêmicas, refletindo seu papel na organogênese. Em contextos de pesquisa, FRAS1 é estudada por suas contribuições para a montagem da matriz extracelular, a formação da barreira epitelial e redes de sinalização do desenvolvimento que moldam o padrão dos tecidos.

FRAS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FRAS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FRAS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FRAS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FRAS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FRAS1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FRAS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FRAS1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FRAS1 em células tumorais com expressão de FRAS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.