fractalkine Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402339-ACT

CX3CL1 codifica a fractalcina, uma quimiocina CX3C única que existe tanto como uma molécula de adesão ancorada à membrana quanto como um quimioatraente solúvel. Por meio de seu receptor CX3CR1, a fractalcina regula a adesão de leucócitos, a quimiotaxia e a comunicação entre micróglia e neurônios, conectando a sinalização de quimiocinas ao tráfego inflamatório e à vigilância tecidual. A atividade CX3CL1–CX3CR1 cruza-se com programas inflamatórios conduzidos por NF-κB e modula a ativação endotelial e o recrutamento de células imunes. A desregulação da sinalização da fractalcina tem sido associada à neuroinflamação, à inflamação vascular e às interações entre tumor e sistema imune, tornando o CX3CL1 um nó útil para estudar o crosstalk imune–estromal e a patobiologia inflamatória.

fractalkine O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CX3CL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

fractalkine O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CX3CL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CX3CL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de fractalkine. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CX3CL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de fractalkine no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via fractalkine em células tumorais com expressão de CX3CL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.