FPR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418173-ACT

O recetor do péptido formilado 1 (FPR1) codifica o FPR, um GPCR de sete hélices transmembrana que deteta péptidos N-formilados derivados de bactérias e de mitocôndrias danificadas, permitindo quimiotaxia rápida de neutrófilos e monócitos. O FPR1 acopla-se principalmente a proteínas Gi para ativar a PLCβ, o fluxo intracelular de Ca2+, as vias PI3K/AKT e MAPK, coordenando a remodelação da actina, a ativação de integrinas, a desgranulação e a geração de espécies reativas de oxigénio. Por estas vias, o FPR1 molda a vigilância imunitária inata e o microambiente inflamatório em locais de infeção ou de lesão tecidular estéril. A sinalização desregulada do FPR1 tem sido investigada em condições inflamatórias crónicas e na inflamação associada a tumores, nas quais alterações no recrutamento e na ativação de leucócitos podem influenciar a biologia da doença.

FPR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FPR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FPR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FPR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FPR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FPR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FPR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FPR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FPR em células tumorais com expressão de FPR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.