FOXP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431094-ACT

Foxp2 codifica o fator de transcrição da família forkhead box FOXP2, um regulador específico de sequência que coordena programas gênicos que controlam a diferenciação neuronal, a migração e a plasticidade sináptica. No sistema nervoso do camundongo, o FOXP2 é fortemente expresso em circuitos córtico–gânglios da base e cerebelares, onde influencia a transcrição dependente de atividade e a conectividade importantes para a aprendizagem motora e comportamentos relacionados à vocalização. O FOXP2 se integra a redes mais amplas de regulação transcricional e da cromatina para moldar o tempo do desenvolvimento e a maturação dos circuitos. A desregulação da expressão gênica dependente de FOXP2 tem sido associada a fenótipos neurodesenvolvimentais alterados e oferece um ponto de entrada mecanístico para estudar o controle transcricional no desenvolvimento e na função do cérebro.

FOXP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Foxp2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOXP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Foxp2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Foxp2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOXP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Foxp2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOXP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOXP2 em células tumorais com expressão de Foxp2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.