FOXP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417494-ACT

FOXP2 codifica um fator de transcrição da família forkhead box que orquestra programas de regulação gênica necessários para a diferenciação neuronal, o crescimento de neuritos e a plasticidade sináptica, com papéis de destaque em circuitos córtico-estriatais e cerebelares envolvidos na aprendizagem motora e na vocalização. Como regulador que se liga ao DNA, o FOXP2 modula redes transcricionais que controlam o estado da cromatina, o processamento de RNA e a sinalização dependente de atividade, moldando trajetórias do neurodesenvolvimento. Variação genética ou alterações na dosagem de FOXP2 têm sido associadas a prejuízos de fala e linguagem e a fenótipos neurodesenvolvimentais mais amplos, tornando-o um nó útil para dissecar o controle transcricional da função de circuitos neurais. A modulação experimental de FOXP2 dá suporte a estudos de especificação de linhagem dirigida por fatores de transcrição e de remodelamento de vias a jusante em modelos celulares humanos.

FOXP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOXP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOXP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOXP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOXP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOXP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOXP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOXP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOXP2 em células tumorais com expressão de FOXP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.