FOXI1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-420369-LAC

Foxi1 codifica o fator de transcrição forkhead box FOXI1, um regulador de ligação ao DNA específico de sequência que controla programas de linhagem epitelial e a diferenciação. Em camundongos, o FOXI1 é essencial para o transporte de íons e a homeostase ácido–base ao governar redes transcricionais em células epiteliais especializadas, incluindo aquelas envolvidas na fisiologia renal e do ouvido interno. A regulação ligada ao FOXI1 se cruza com circuitos transcricionais do desenvolvimento e com processos de maturação epitelial que moldam o padrão tecidual e a especialização funcional. A atividade desregulada de FOXI1 está associada a defeitos no desenvolvimento epitelial e a fenótipos relacionados ao manuseio de íons, tornando-o um nó útil para estudar redes regulatórias gênicas subjacentes à organogênese e ao desequilíbrio homeostático.

As Partículas de Ativação Lentivirais FOXI1 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Foxi1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais FOXI1 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Foxi1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de FOXI1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Foxi1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.