FOXI1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408728-ACT

FOXI1 codifica um fator de transcrição da família forkhead box que regula programas de diferenciação epitelial e de transporte iônico, com papéis de destaque no ouvido interno e no ducto coletor renal. Ao controlar redes transcricionais ligadas à secreção de prótons e à homeostase eletrolítica, o FOXI1 influencia o equilíbrio ácido–base e a identidade das células epiteliais. Alterações na atividade de FOXI1 têm sido associadas a anomalias do desenvolvimento que afetam a audição e a função tubular renal, tornando-o relevante para investigar o controle transcricional da fisiologia epitelial. O FOXI1 também é utilizado como marcador e regulador em estudos de especificação de linhagem e organogênese.

FOXI1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOXI1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOXI1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOXI1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOXI1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOXI1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOXI1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOXI1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOXI1 em células tumorais com expressão de FOXI1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.