FOXD1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402521-ACT

FOXD1 (forkhead box D1) é um fator de transcrição da família forkhead que regula programas de especificação do destino celular, proliferação e diferenciação durante o desenvolvimento embrionário, com papéis de destaque na morfogênese renal e na padronização da linhagem estromal. Ao se ligar a motivos de DNA do tipo forkhead, o FOXD1 coordena redes transcricionais que se cruzam com vias de sinalização do desenvolvimento, como WNT, TGF-β e a sinalização MAPK/PI3K induzida por fatores de crescimento, para moldar a arquitetura dos tecidos. A expressão desregulada de FOXD1 tem sido associada a alterações nas interações epitélio–estroma, remodelamento da matriz extracelular e fenótipos celulares invasivos em múltiplos contextos de câncer, tornando-o um nó útil para estudar o controle transcricional de programas do microambiente tumoral. Além disso, circuitos regulatórios de genes ligados ao FOXD1 são relevantes para investigar distúrbios do desenvolvimento e estados transcricionais específicos de linhagem em células humanas.

FOXD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOXD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOXD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOXD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOXD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOXD1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOXD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOXD1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOXD1 em células tumorais com expressão de FOXD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.