follistatin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420417
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- follistatin El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico follistatin, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: follistatin Anticuerpo (C-8): sc-365003
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
follistatin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420417 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Fst del ratón codifica la folistatina, una glicoproteína secretada que se une y neutraliza ligandos de la superfamilia TGF-β, en particular activinas y varias BMP, modulando así programas transcripcionales dependientes de SMAD2/3 y de SMAD1/5/8. Al limitar la disponibilidad de ligandos, la folistatina condiciona decisiones sobre el destino celular, el crecimiento tisular y los procesos de reparación en los sistemas muscular, reproductor y metabólico. La actividad de Fst influye en la miogénesis y en el remodelado asociado a la fibrosis, y el desequilibrio entre activina y folistatina se estudia en contextos de pérdida de masa muscular, señalización inflamatoria y fenotipos reproductivos. Como regulador extracelular clave de la señalización por factores de crecimiento, Fst constituye un punto abordable para analizar la comunicación cruzada entre vías y la retroalimentación en circuitos del desarrollo y la homeostasis.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO follistatin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Fst en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Fst junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Fst tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína follistatin.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Fst para la investigación de la señalización de follistatin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Fst críticos para la función de follistatin
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Fst para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido follistatin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido follistatin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Fst. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR follistatin (m) y el plásmido HDR follistatin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Fst para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Fst definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.