follistatin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401687-ACT

O FST humano codifica a follistatina, uma glicoproteína secretada que se liga e neutraliza ligantes da superfamília TGF-β, particularmente as activinas e várias BMPs, ajustando assim programas de transcrição dependentes de SMAD2/3 e de SMAD1/5/8. Ao modular a disponibilidade de ligantes, a follistatina influencia o crescimento e a diferenciação celulares, a remodelação tecidual e o crosstalk inflamatório em diversos contextos, incluindo músculo esquelético, tecidos reprodutivos e o microambiente tumoral. A expressão desregulada de FST tem sido associada a alterações na miogénese e na sinalização relacionada com fibrose, a perturbações do eixo reprodutivo e a fenótipos relevantes para o cancro ligados ao desequilíbrio das vias de activina/BMP. Como regulador-chave da via, a follistatina é frequentemente utilizada para investigar a dinâmica das redes de TGF-β e os efeitos da sinalização parácrina em modelos celulares engenheirados.

follistatin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FST sem alterar a sequência de ADN subjacente.

follistatin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FST em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FST, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de follistatin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FST nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de follistatin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via follistatin em células tumorais com expressão de FST silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.