Plásmido CRISPR de Activación (h) FNDC1: sc-413674-ACT

FNDC1 (dominio tipo III de fibronectina que contiene 1) codifica una proteína citoplasmática caracterizada por motivos similares al dominio tipo III de fibronectina, implicada en la regulación de la adhesión celular, la organización del citoesqueleto y la transducción de señales. Se han descrito asociaciones funcionales que vinculan a FNDC1 con procesos como la migración y la proliferación a través de vías sensibles a factores de crecimiento, incluidas las rutas de señalización PI3K/AKT y MAPK, así como con la modulación de las respuestas celulares al estrés. Se ha observado una expresión alterada de FNDC1 en múltiples contextos relevantes para enfermedades, lo que respalda su uso como diana de investigación para estudiar la reprogramación de vías y la plasticidad fenotípica. El análisis experimental de FNDC1 puede ayudar a definir cómo las señales extracelulares se integran en programas transcripcionales y del citoesqueleto en células humanas.

FNDC1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FNDC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FNDC1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FNDC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FNDC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FNDC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FNDC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FNDC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FNDC1 en células tumorales con expresión de FNDC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.