FN3K CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412985-ACT

ヒトFN3Kはフルクトサミン-3-キナーゼをコードしており、これは細胞質に局在する酵素で、糖化タンパク質上のフルクトシルリジンや関連するケトアミンをリン酸化し、それらを不安定化させた後の脱糖化を促進します。終末糖化産物（AGEs）の蓄積や、糖化を介したタンパク質機能障害を抑えることで、FN3Kはグルコースフラックスが高い状況におけるプロテオスタシスと、レドックス感受性の代謝恒常性の維持に寄与します。FN3K活性は、非酵素的なタンパク質糖化の負荷を調節することで、糖代謝および細胞ストレス応答と交差します。FN3Kの発現や機能の変化は、慢性的な高血糖に伴う代謝異常や合併症との関連に加え、タンパク質品質管理に対するより広範な影響という観点からも研究されています。

FN3K CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FN3Kの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FN3K CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FN3K 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFN3K転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FN3Kの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFN3K遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFN3K依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFN3K発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFN3K経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。