FMR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401919-ACT

O FMR1 codifica a proteína do retardo mental do X frágil (FMRP), uma proteína de ligação a RNA que regula o transporte, a estabilidade e a repressão translacional de mRNAs nas sinapses e em outros compartimentos neuronais. A FMRP modula a síntese proteica dependente de atividade por meio de interações com complexos ribonucleoproteicos e vias de sinalização que moldam a plasticidade sináptica, incluindo a tradução dependente de mGluR e programas mais amplos de desenvolvimento neuronal. A desregulação da expressão ou da função de FMR1 está associada a transtornos relacionados ao X frágil e a fenótipos do neurodesenvolvimento, tornando-o um alvo amplamente utilizado para estudar o controle pós-transcricional no cérebro. Em células cultivadas e sistemas modelo, o FMR1 é comumente investigado para mapear alvos de RNA, definir redes de controle translacional e explorar mecanismos de expressão gênica responsiva à atividade.

FMR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FMR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FMR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FMR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FMR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FMR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FMR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FMR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FMR1 em células tumorais com expressão de FMR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.