Flt-3/Flk-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400218-ACT

FLT3 (Flt-3/Flk-2) codifica uma tirosina-quinase recetora de classe III, expressa predominantemente em progenitores hematopoiéticos, em que a ligação do ligando de FLT3 promove proliferação, sobrevivência e diferenciação. A ativação do recetor desencadeia a sinalização a jusante PI3K–AKT, RAS–MAPK e JAK–STAT, integrando sinais que regulam o desenvolvimento mieloide e linfoide. A sinalização desregulada de FLT3, incluindo mutações ativadoras e expressão aberrante, é frequentemente estudada no contexto da leucemogénese e da alteração do destino das células hematopoiéticas. Como resultado, FLT3 serve como uma ferramenta molecular amplamente utilizada para investigar a sinalização de recetores de fatores de crescimento, a biologia de progenitores e a reorganização de redes impulsionada por quinases oncogénicas em modelos celulares humanos.

Flt-3/Flk-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FLT3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Flt-3/Flk-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FLT3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FLT3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Flt-3/Flk-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FLT3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Flt-3/Flk-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Flt-3/Flk-2 em células tumorais com expressão de FLT3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.