Flt-1/VEGFR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400330-ACT

FLT1 codifica o Flt-1/VEGFR1, um receptor tirosina-quinase de alta afinidade para VEGF-A, VEGF-B e o fator de crescimento placentário, que modula a disponibilidade de ligantes e a intensidade da sinalização em linhagens endoteliais e mieloides. O VEGFR1 participa da angiogênese, da permeabilidade vascular, da migração endotelial e do recrutamento de células inflamatórias por meio de vias que incluem PI3K–AKT, MAPK/ERK e sinalização dependente de PLCγ. As isoformas de VEGFR1 tanto ligadas à membrana quanto solúveis moldam gradientes de VEGF e a maturação dos vasos, vinculando a regulação de FLT1 às respostas à hipóxia e ao remodelamento tecidual. A desregulação da sinalização de FLT1/VEGFR1 tem sido associada à neovascularização patológica e à disfunção vascular observadas em câncer, em contextos isquêmicos e em doenças inflamatórias, sustentando seu uso como um nó mecanístico em pesquisas sobre vasos e microambiente.

Flt-1/VEGFR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FLT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Flt-1/VEGFR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FLT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FLT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Flt-1/VEGFR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FLT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Flt-1/VEGFR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Flt-1/VEGFR1 em células tumorais com expressão de FLT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.