FLIP_S/L Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400400-LAC

CFLAR codifica la proteina cellulare inibitrice di FLICE (FLIP S/L), un omologo della caspasi-8 cataliticamente inattivo che modula la segnalazione dei recettori di morte controllando l’assemblaggio del DISC e l’attivazione della caspasi-8. Attraverso queste interazioni, le isoforme di FLIP regolano finemente l’apoptosi estrinseca, influenzano la scelta tra necroptosi e apoptosi e plasmano la segnalazione infiammatoria legata a NF-κB a valle di TNFR1 e dei recettori Fas/TRAIL. Un’alterata espressione di CFLAR è spesso associata a fenotipi di resistenza all’apoptosi ed evasione immunitaria, rendendolo rilevante per studi sulla sopravvivenza delle cellule tumorali, sull’infiammazione cronica e sulle interazioni ospite–patogeno. CFLAR viene anche utilizzato per indagare i meccanismi della segnalazione di sopravvivenza guidata dalle citochine e il crosstalk tra vie apoptotiche e dell’immunità innata.

Le particelle di attivazione lentivirale FLIPS/L (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CFLAR in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FLIPS/L (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CFLAR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FLIPS/L. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CFLAR e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.