Plásmido Doble Nickase (h) FLG/Filaggrin: sc-400644-NIC

FLG codifica la filagrina, una proteína estructural clave que se produce como profilagrina en queratinocitos en proceso de diferenciación y se procesa proteolíticamente en monómeros de filagrina que agregan los filamentos intermedios de queratina. Esta función favorece la diferenciación terminal de la epidermis, la compactación de los corneocitos y la formación de la barrera del estrato córneo; además, sus productos de degradación posteriores contribuyen a los factores naturales de hidratación que regulan la hidratación y el pH de la superficie cutánea. La actividad de FLG se integra con los programas de queratinización y de ensamblaje de la envoltura cornificada, aguas abajo de redes de señalización de la diferenciación epidérmica. La variación genética o la disminución de la expresión de filagrina se asocia estrechamente con fenotipos de disfunción de la barrera y con susceptibilidad a enfermedades inflamatorias de la piel, por lo que FLG es un objetivo frecuente en estudios de homeostasis epitelial y de mecanismos de inflamación cutánea.

FLG/Filaggrin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FLG en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FLG. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FLG. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FLG alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.