FKHRL1/FOXO3a Double Nickaseプラスミド (h): sc-400308-NIC

FOXO3（FKHRL1/FOXO3a）は、forkhead box O（FOXO）転写因子をコードしており、増殖因子および栄養シグナルを統合して、細胞周期の制御、酸化ストレス抵抗性、オートファジー、アポトーシスを調節する。FOXO3の活性は、翻訳後修飾によって厳密に制御されている。これには、PI3K–AKT経路下流でのAKTによるリン酸化（細胞質への隔離を促進）に加え、AMPKやJNKなどのストレス応答性入力（核内局在と転写出力を促進）が含まれる。代謝、DNA損傷応答、プロテオスタシスに関わる標的遺伝子の調節を通じて、FOXO3は複数の系譜にわたり細胞恒常性の維持に寄与する。FOXO3シグナルの制御異常は、ストレス耐性や生存プログラムの変化と関連しており、がん生物学、神経変性、代謝機能障害、免疫調節に関わる現象として報告されている。

FKHRL1/FOXO3a ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FOXO3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FOXO3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FOXO3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FOXO3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。