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FKHR/FOXO1双切口酶质粒(h) | sc-400137-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FKHR/FOXO1双切口酶质粒(h2) | sc-400137-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FOXO1(FKHR)编码一种叉头框(forkhead box)转录因子,将胰岛素/IGF-1 与 PI3K–AKT 信号整合到调控代谢、氧化应激反应、细胞周期阻滞和细胞凋亡等细胞程序中。AKT 依赖性的磷酸化调控 FOXO1 在细胞核与细胞质之间的穿梭以及其转录输出,从而把营养状态与基因表达程序(如糖异生和自噬)联系起来。FOXO1 还与 TGF-β/SMAD 和 MAPK 通路发生串联作用,以调节分化与组织稳态。FOXO1 活性或定位的失调与代谢功能障碍和肿瘤生物学相关;此外,FOXO1 的基因组改变(如融合事件)也被用于研究肿瘤相关的转录重编程。
FKHR/FOXO1 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 FOXO1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对FOXO1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏FOXO1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了FOXO1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。