FKBP2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-409613-NIC

FKBP2 codifica a proteína de ligação a FK506 2 (FK506-binding protein 2), uma isomerase peptidil-prolil cis–trans residente no retículo endoplasmático (RE) que atua como chaperona molecular, auxiliando o dobramento e o controle de qualidade de proteínas secretórias e de membrana. Como membro da família das imunofilinas, a FKBP2 contribui para a proteostase do RE e se integra à sinalização da resposta a proteínas mal dobradas (unfolded protein response, UPR) e às vias de degradação associada ao RE (ER-associated degradation, ERAD) durante o estresse celular. A perturbação da capacidade de chaperonas do RE e das dinâmicas de dobramento reguladas por imunofilinas é relevante para mecanismos implicados em doenças de mau dobramento proteico e em fenótipos adaptativos ao estresse em células humanas. Assim, a FKBP2 é frequentemente estudada no contexto da regulação da via secretória, da homeostase do RE ligada ao estado redox e ao cálcio, e da modulação da maturação proteica.

FKBP2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus FKBP2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de FKBP2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função FKBP2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com FKBP2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.