fish Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401277
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- fish O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico fish, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:fish Anticorpo (G-7): sc-376211
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
fish Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401277 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
SH3PXD2A codifica a proteína adaptadora TKS5, um substrato de Src que atua como plataforma de montagem para complexos de sinalização e de regulação da actina necessários para a formação de podossomas e invadopódios. Por meio dos seus domínios SH3 e do domínio PX, a TKS5 coordena a dinâmica de membrana dependente de PI3K, a maquinaria de polimerização de actina e o tráfego de metaloproteases para sustentar a remodelação da matriz extracelular e a migração celular. A reorganização do citoesqueleto impulsionada por SH3PXD2A está associada a comportamento celular invasivo e a alterações da arquitetura tecidual, tornando-a relevante para estudos de progressão tumoral, remodelação associada à fibrose e motilidade de células vasculares. Em contextos imunes e do estroma, perturbações de TKS5 afetam estruturas de adesão e programas de migração direcional que se cruzam com a sinalização Src/FAK e vias de GTPases da família Rho.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO fish (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SH3PXD2A em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SH3PXD2A, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SH3PXD2A na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína fish.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SH3PXD2A para a investigação da sinalização de fish, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SH3PXD2A críticos para a função fish
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SH3PXD2A para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo fish Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo fish Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SH3PXD2A. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo fish Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR fish (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SH3PXD2A para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SH3PXD2A definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.