fish CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401277

概要

SH3PXD2Aは、Srcの基質であるアダプタータンパク質TKS5をコードしており、ポドソームおよびインバドポディア形成に必要なアクチン制御複合体やシグナル伝達複合体の足場として機能します。TKS5はSH3ドメインおよびPXドメインを介して、PI3K依存的な膜動態、アクチン重合装置、ならびにメタロプロテアーゼの輸送を協調的に制御し、細胞外マトリックスのリモデリングと細胞移動を支えます。SH3PXD2Aに駆動される細胞骨格再編は浸潤性の細胞挙動や組織構築の変化と関連しており、腫瘍進展、線維化に伴うリモデリング、血管系細胞の運動性の研究において重要です。免疫系および間質の文脈では、TKS5の攪乱が接着構造や方向性移動プログラムに影響し、これらはSrc/FAKシグナルやRhoファミリーGTPアーゼ経路と交差します。

fish CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSH3PXD2A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SH3PXD2A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SH3PXD2Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、fishタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、fishシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SH3PXD2A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• fishの機能に不可欠なSH3PXD2Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SH3PXD2Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• fish CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびfish CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SH3PXD2A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  fish HDRプラスミド（h）および fish HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSH3PXD2Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSH3PXD2A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。