Fis1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401007-ACT

O gene FIS1 humano codifica a proteína 1 de fissão mitocondrial (Fis1), um adaptador da membrana externa da mitocôndria que ajuda a recrutar e organizar a maquinaria de fissão para controlar a divisão, a morfologia e a distribuição mitocondriais. Ao coordenar a dinâmica mitocondrial com o estado bioenergético, a mitofagia e a sinalização apoptótica, a Fis1 contribui para as respostas ao estresse celular e para o controle de qualidade da rede mitocondrial. Alterações na expressão de FIS1 ou um desequilíbrio entre fissão e fusão têm sido associadas a fenótipos de disfunção mitocondrial observados em doenças neurodegenerativas, distúrbios cardiometabólicos e na reprogramação metabólica associada ao câncer. Em sistemas experimentais, a modulação de FIS1 é usada para investigar como a arquitetura mitocondrial influencia o manejo de ROS, a homeostase de cálcio e a sinalização imune inata originada nas mitocôndrias.

Fis1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FIS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Fis1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FIS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FIS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Fis1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FIS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Fis1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Fis1 em células tumorais com expressão de FIS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.