Fibrinogen β Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401819-ACT

FGB codifica a cadeia β do fibrinogénio, um componente essencial do hexâmero de fibrinogénio que é convertido proteoliticamente pela trombina em fibrina durante a fase terminal da cascata de coagulação. Em conjunto com as interações com a integrina plaquetária αIIbβ3 e com outras proteínas da matriz extracelular, o fibrinogénio sustenta a formação do coágulo, a reparação tecidular e a modulação do recrutamento de células inflamatórias. A expressão de FGB está estreitamente ligada às respostas hepáticas de fase aguda e a programas de sinalização por citocinas que remodelam a composição das proteínas plasmáticas durante a inflamação sistémica. Alterações genéticas ou adquiridas na estrutura ou na abundância do fibrinogénio têm sido associadas a fenótipos hemorrágicos ou trombóticos, tornando o FGB um ponto de interesse útil para estudar a hemostase e a patologia vascular associada à inflamação.

Fibrinogen β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FGB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Fibrinogen β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FGB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FGB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Fibrinogen β. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FGB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Fibrinogen β no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Fibrinogen β em células tumorais com expressão de FGB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.