Fibrillarin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400741

概要

FBLはフィブリラリンをコードしており、フィブリラリンは核小体に必須のメチルトランスフェラーゼとして、box C/D snoRNP複合体内でpre-rRNAの2′-O-リボースメチル化を触媒し、リボソーム生合成と翻訳能を支えます。フィブリラリンはpre-rRNAのプロセシング、核小体の組織化、そして細胞増殖やストレス応答と連動したRNA修飾の制御に寄与します。核小体の恒常性やリボソーム産生の破綻は、増殖性疾患や神経発達関連疾患で繰り返し認められる特徴であり、FBLの機能異常はRNAプロセシング・プログラムや細胞の適応能（フィットネス）の変化と関連づけられています。さらにフィブリラリンは全身性自己免疫疾患における代表的な自己抗原としてもよく知られており、核小体RNPの生物学と免疫による認識を結び付ける存在です。

Fibrillarin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFBL遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FBL内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FBLのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Fibrillarinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Fibrillarinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FBL欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Fibrillarinの機能に不可欠なFBLエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FBLゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Fibrillarin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFibrillarin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FBL遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Fibrillarin HDRプラスミド（h）および Fibrillarin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFBLホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFBL標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。