FHOD3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405102-ACT

FHOD3 (formin homology 2 domain containing 3) codifica uma formina nucleadora de actina que coordena o alongamento dos filamentos e a organização do citoesqueleto. No músculo estriado, a FHOD3 contribui para a integridade do sarcômero e para a miofibrilogênese, ligando a sinalização das GTPases da família Rho à remodelação da actina e à manutenção do aparato contrátil. Alterações na expressão ou variações em FHOD3 têm sido associadas a defeitos estruturais em cardiomiócitos e são estudadas no contexto de cardiomiopatias e de uma desregulação citoesquelética mais ampla. Como reguladora da dinâmica da actina, FHOD3 é relevante para investigações sobre morfologia celular, mecanotransdução e maturação de células musculares.

FHOD3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FHOD3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FHOD3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FHOD3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FHOD3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FHOD3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FHOD3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FHOD3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FHOD3 em células tumorais com expressão de FHOD3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.