FHOD1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404286-ACT

FHOD1（formin homology 2 domain containing 1）は、直鎖状のアクチンフィラメントの重合を触媒し、アクチンと微小管のクロストークを協調させることで、細胞形態、接着、方向性のある遊走を制御するDiaphanous関連フォルミンをコードします。FHOD1の活性は、Rho GTPアーゼに連動した細胞骨格リモデリング経路に影響し、ストレスファイバーや収縮性アクトミオシン構造の形成に寄与します。こうした細胞骨格ダイナミクスにおける役割を通じて、FHOD1は組織リモデリング、浸潤性の細胞挙動、ならびにがん生物学を含む複数の疾患文脈で観察される運動性の破綻といったプロセスとの関連が示されています。したがって、FHOD1の発現を調節することは、ヒトモデル系におけるメカノトランスダクション、細胞極性、遊走依存的表現型の機構を解析するうえで有用です。

FHOD1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FHOD1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FHOD1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FHOD1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFHOD1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FHOD1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFHOD1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFHOD1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFHOD1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFHOD1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。